全自动分子膨胀显微镜-上海沃埃迪

全自动分子膨胀显微镜

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全自动分子膨胀显微镜
产品描述：	纳米级成像的自动化解决方案。使用 GelCast 全自动膨胀显微镜（ExM）样本处理机器人，简化工作流程并标准化每一步。

优势：
ExM 轻松上手
GelCast 可完全自动化 ExM 工作流程的所有步骤，从样品到载玻片装片。
孔板格式
与细胞和组织相容
完全可定制的样品流程
免手动操作

主要特点：

应用：
组织胚体为研究疾病提供了具有生理相关性的平台，但其密集的结构会阻碍深度、高分辨率的成像。扩展显微镜（ExM）能够将样本物理放大，从而提高分辨率、表位可及性和光学清晰度。我们将 ExM 与 AION（一种具有可切换小孔、快速大视野成像和极低光毒性特点的下一代共聚焦系统）相结合。这种方法使得对深度超过 600 微米的扩增小鼠小肠组织胚体进行超分辨率的快速体积成像成为可能。该系统的灵活性使得对比度优化得以实现，同时又不会牺牲分辨率。与自动样本制备和变形校正相结合，这种集成的工作流程在基于组织胚体的研究和转化应用中具有作为稳健、可扩展的深度组织成像平台的潜力。
用于研究疾病的相关模型。高分辨率的体积成像对于全面理解疾病的分子机制以及这些模型中的空间关系是必不可少的。然而，器官体的复杂结构带来了诸多挑战，包括光散射和抗体穿透受限等问题。扩展显微镜（ExM）（Chen 等人，2015 年）为这些问题提供了一种独特的解决方案。在 ExM 中，器官体可以嵌入可膨胀的水凝胶中，从而物理性地扩大样本并用水取代大部分结构。这种基于纯样本制备的方法不仅提高了成像系统的分辨率，还降低了样本密度以实现光学透明化，并增加了抗原的可及性。因此，ExM 是一种强大的技术，有助于进行高分辨率的深层组织成像。例如，对于深度超过 200 微米的扩展器官体，高分辨率深层组织成像的主要障碍在于使用一种能够进行深度成像且对散射光的不良影响敏感性低、光漂白程度小的显微镜方法，同时还要最大限度地提高信号与噪声的比值。

小鼠小肠组织球（mSI）由萨斯基亚·苏伊克布伊克（乌得勒支大学）提供，并按照之前所述的方法进行培养（加西亚等人，2021 年）。使用一种改进的 U-ExM 协议对组织球进行扩展显微镜处理（加马博托托等人，2018 年）。用总蛋白标记物 NHS-酯对组织球进行标记，从而能够在这些样本中实现细胞超微结构的体积可视化（图 1A）。特别地，在凝胶形成后，向样本中添加了 ATTO 647N NHS-酯（ATTO-TEC 股份公司）。NHS-酯与蛋白质上的初级胺结合，导致整个样本被 ATTO 647N 荧光染料完全标记。经过扩展和标记后，将凝胶固定在 1.5H 玻璃盖片上，使用聚-L-赖氨酸固定，并在水浸的 Attofluor 细胞室（Invitrogen）中进行成像（图 1B）。对凝胶的宏观测量表明，扩增因子为 4 倍。EXM 伴线扫描共聚焦通过扩展显微镜的解聚效应，实现了对详细结构的可视化，并结合了更广泛的背景信息。使用 Line REscan AION 对扩大的组织球内的结构进行了研究。AION 是一款前沿的共聚焦显微镜，擅长进行活细胞和组织培养物的成像，它将温和的三维成像与前所未有的高速度和视野相结合。重要的是，AION 是目前最温和的共聚焦显微镜，具有可切换的孔径环，能够减少光漂白现象，并在固定样本中保持荧光。我们利用了 AION 的这一特性，使用 44 微米和 88 微米宽的狭缝对 mSI 进行成像，当使用 30x/1.05 NA 目镜时，为我们提供了分别为 1.8AU 和 3.6AU 的共聚焦成像效果（图 2）。

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